產(chǎn)品原理：

蛋白質(zhì)的變性作用主要是由于蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的結(jié)構(gòu)被破壞。天然蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)是通過(guò)氫鍵等次級(jí)鍵維持的，而變性后次級(jí)鍵被破壞，蛋白質(zhì)分子就從原來(lái)有序的卷曲的緊密結(jié)構(gòu)變?yōu)闊o(wú)序的松散的伸展?fàn)罱Y(jié)構(gòu)（但一級(jí)結(jié)構(gòu)并未改變）。熱變性是蛋白質(zhì)變性中最常見(jiàn)的一類現(xiàn)象。

蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性是指蛋白質(zhì)多肽鏈在溫度影響下的形變能力，主要體現(xiàn)在溫度改變時(shí)多肽鏈獨(dú)特的化學(xué)特性和空間構(gòu)象的變化，變化越小熱穩(wěn)定性越高。蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性受到不同溫度、pH值、離子強(qiáng)度等外界因素的影響，在生物技術(shù)、藥物研發(fā)以及食品工業(yè)等領(lǐng)域，具有重要意義。

蛋白質(zhì)變性溫度是生物學(xué)家們研究蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性的一個(gè)重要的概念，是指蛋白質(zhì)在特定溫度條件下受到熱力作用時(shí)，其結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的溫度點(diǎn)，一般溫度較高時(shí)，蛋白質(zhì)從穩(wěn)定的三維結(jié)構(gòu)變化成松散的無(wú)序結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性一般使用熱變性中點(diǎn)溫度(melting temperature，Tm)來(lái)表示，即蛋白質(zhì)解折疊50%時(shí)的溫度。蛋白質(zhì)的熱變性過(guò)程與其空間構(gòu)象的改變密切相關(guān)，Tm值能反映變溫過(guò)程中蛋白質(zhì)構(gòu)象改變的趨勢(shì)，是衡量蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的一個(gè)重要指標(biāo)。蛋白質(zhì)Tm值的測(cè)定在生物醫(yī)藥行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用，如嗜熱蛋白、工業(yè)酶等的改造與篩選，蛋白質(zhì)藥物與配體、制劑或輔料的相互作用，蛋白質(zhì)藥物的緩沖液穩(wěn)定條件篩選等。

差示掃描熒光法(differential scanning fluorimetry, DSF)是一種方便快捷的高通量藥物篩選及靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)的方法，通過(guò)熒光染料或蛋白內(nèi)源熒光信號(hào)檢測(cè)升溫過(guò)程中蛋白構(gòu)象的變化計(jì)算其熔解溫度Tm（折疊蛋白與去折疊蛋白相等時(shí)的溫度）。蛋白中的色氨酸和酪氨酸可以被280 nm的紫外光激發(fā)并釋放出熒光，其熒光性質(zhì)與所處的微環(huán)境密切相關(guān)。蛋白變性過(guò)程中，色氨酸從疏水的蛋白內(nèi)部逐漸暴露到溶劑中，熒光釋放的峰值也從330 nm逐漸轉(zhuǎn)移到350 nm。該方法具有蛋白樣品消耗量少、通量高、溫度變化范圍廣及數(shù)據(jù)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性（蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性參數(shù)及其影響因素）、蛋白結(jié)構(gòu)和構(gòu)象、蛋白-配體相互作用及蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、抑制劑、輔助因子等領(lǐng)域的研究。

• 抗體或疫苗制劑、酶制劑的高通量篩選
• 抗體或疫苗、酶制劑的化學(xué)穩(wěn)定性、長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)估、等溫穩(wěn)定性研究等
• 生物仿制藥相似性研究（Biosimilar Evaluation）
• 抗體偶聯(lián)藥物（ADC）研究
• 多結(jié)構(gòu)域去折疊特性研究
• 物理和化學(xué)條件強(qiáng)制降解研究
• 蛋白質(zhì)變復(fù)性研究（復(fù)性能力、復(fù)性動(dòng)力學(xué)等）
• 膜蛋白去垢劑篩選，膜蛋白結(jié)合配體篩選（Thermal Shift Assay）
• 基于靶標(biāo)的高通量小分子藥物篩選（Thermal Shift Assay）
• 蛋白純化條件快速優(yōu)化等

差示掃描熒光法(differential scanning fluorimetry, DSF)包括兩種：染料法DSF、內(nèi)源DSF（intrinsic DSF）。

最常用的染料法DSF是通過(guò)標(biāo)記染料來(lái)檢測(cè)升溫過(guò)程中蛋白構(gòu)象的變化。比如SYPRO Orange，是一種環(huán)境敏感的疏水染料，當(dāng)溫度升高時(shí)，蛋白去折疊，疏水部分暴露出來(lái)，染料與蛋白質(zhì)的疏水部分特異性結(jié)合，熒光增強(qiáng)。在有特定化合物或配體結(jié)合的情況下，蛋白穩(wěn)定性會(huì)上升，表現(xiàn)為熔解溫度的上升。

內(nèi)源DSF（intrinsic DSF）則是基于蛋白去折疊過(guò)程中色氨酸發(fā)射光譜的位移進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)檢測(cè)溫度變化/變性劑濃度變化過(guò)程中蛋白內(nèi)源紫外熒光（350 nm/330 nm比值）的改變，獲得蛋白的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)。相比傳統(tǒng)的方法，無(wú)需添加染料，通量高，樣品用量少，數(shù)據(jù)精度高。